随着马铃薯种薯的不断退化,人们为培养出优质的马铃薯而采用了多种脱毒效果检测,今天和大家分享马铃薯脱毒效果检测的几种方式。
一、指示植物鉴定
所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物。每种病毒都有自己敏感的植物。例如:
马铃薯病毒敏感的植物有:千日红、黄花烟、心叶烟、毛叶曼陀罗。
大丽花病毒的敏感植物有:矮牵牛、黄瓜、苋色莴。
菊花病毒敏感植物有:矮牵牛、豇豆。
指示植物鉴定病毒的方法:
1.摩擦接种法
取培养植物的叶层置于研钵中,加入少量的水和等量的0.1mol/l磷酸缓冲液(ph7.0)。磨成匀浆,将其涂抹在指示植株叶片上,在指示植物的叶片上,撒施金刚砂,通过轻轻摩擦使汁液浸入叶片表皮细胞而不损伤叶片,5分钟后用清水清洗叶面,将指示植物放于有防蚜网罩的温室内,然后视其病斑的有无来判断是否脱除了病毒。
例如:植物液接种后如使千日红叶片产生枯斑;黄花烟、心叶烟呈花叶。证明该植物体内具有马铃薯x病毒。
2.嫁接法
有些植物病毒不是通过汁液传播,而是通过介体传播的,例如草莓丛枝病毒,草莓丛枝病毒是通过一种特殊的蚜虫为介体进行传播的,这种病毒的鉴定需将培养植株的芽嫁接在敏感植物上,根据敏感植物的病症来判断是否脱除了病毒。
二、血清鉴定
1.试管沉淀反应
在抗原--抗体最适比例的条件下,观察有无沉淀的产生来确定被测植株是否带病毒。试管沉淀反应操作简单,需注意的问题:
(1)叶绿体的自发凝:可用磷酸缓冲液提取汁液,再用氯仿处理除去叶绿体,ph保持在6.5~8.5。
(2)抗原抗体最适比例要适合,当抗原过量时会抑制沉淀的形成。
2.免疫双扩散
在半固体凝胶中测定在其中扩散的抗原和抗体间的沉淀反应的方法。与沉淀法比较起来有两个优点。一是节约血清,二是汁液不用特殊处理。
步骤如下:(1)倒胶:一般厚2mm。(2)打孔:多打成梅花型。(3)加样:加血清和汁液。一般加样后在37℃恒温下过夜,即可进行结果观察。扩散沉淀的即为毒株,没有则为无毒株。
3.酶联免疫吸附测定
它是将抗原、抗体的免疫和酶的高效催化反应有机结合起来的一种综合性技术。即通过化学的方法将酶抗体或抗原结合起来,形成酶标记物。
然后将它与相应的抗原或抗体起反应,形成酶标记的免疫复合物。结合在免疫复合物的酶,在遇到相应的底物时,催化无色底物生成有色底物,通过比色计可以准确测定。优点是灵敏度高,测定快速,每次可以同时测定多个样品。
三、电镜检查法
采用电子显微镜,可直接观察样品有无病毒存在,还可以进一步鉴定病毒颗粒大小,形状和结构,这些特征相当稳定,因此电镜检查法既准确又有效,但需要较高的设备和技术。
四、分子检测测法
例如:rt~pcr将待测样品的总rna与dna合成的试剂盒进行反应,合成cdna,然后利用病毒dna特有的序列设计引物进行pcr反应,即可知道在寄主中是否有病毒基因的表达。
1.脱毒菌的离体保存与繁殖一般在实验室进行,一般每月继代一次,可以在培养基中加入生长延缓剂,如b9和矮壮素可2~3月继代一次,也可放在液氮或4℃冰箱中保存。
2.建立脱毒种薯种苗生产繁殖网络体系:如果试管苗生产成本过高或移栽困难,可将试管苗选择种植在一定控制区域,从繁殖技术和环境隔离上保证较高水平,使得繁殖的种苗能有效地防止病毒的再浸染。
上面这几种马铃薯脱毒效果检测的措施,你了解了吗?若是想要检测马铃薯种薯的状态,不妨尝试一下这几种检测方式吧